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产品概述 
T4 DNA Ligase催化双链DNA或RNA上相邻的5'-磷酸末端和3'-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平齐末端或粘性末端之间的连接，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻。 

产品组分 
T4 DNA Ligase (Rapid) (2000 U/μl)

来源 
克隆有来自T4噬菌体DNA Ligase基因的重组E. coli菌株。

保存条件 
-30 ~ -15℃保存，≤0℃运输。 

单位定义 
1单位指在50 μl 1 × T4 DNA连接酶反应缓冲液中，23℃反应条件下，30分钟能使50% 的经HindⅢ消化的λDNA片段(100 ng)连接所需的酶量。 

反应缓冲液 
2× Rapid Ligation Buffer 
132 mM Tris-HCI pH 7.6 @ 25°C 
20 mM MgCl2 
2 mM DTT 
2 mM ATP 
15% PEG 6,000 
10 × T4 DNA Ligase Buffer 
500 mM Tris-HCI pH 7.6 @ 25°C 
100 mM MgCl2 
50 mM DTT 
10 mM ATP 

注意事项 
1. 建议插入片段与载体的摩尔比应在3:1 - 10:1。 
2. 平末端载体与片段进行连接时，应首先将载体进行去磷酸化处理，防止其自身环化。 
3. dA-Tailing产物与DNA Adapter的摩尔浓度比在1:10 - 1:20。 
4. T4 DNA Ligase不稳定，使用时冰上操作，用完立即放回-20℃。 

实验案例1: DNA片段和载体DNA的连接 
1. 在微量离心管中配制如下连接反应体系: 

a. 插入片段与载体的摩尔比应在3:1 - 10:1。 
b. 平末端载体与片段进行连接时，应首先将载体进行去磷酸化处理，防止其自身环化。

2. 16°C过夜反应 
3. 转化 
4. 将连接产物加入到100 μl感受态细胞中(连接产物的体积不应超过感受态细胞体积的1/6)，轻轻弹匀，冰上孵育30 min。 
5. 将离心管置于42°C水浴，不要晃动，准确热激90 sec后，立刻置于冰水浴中，静置2 - 3 min。 
6. 向离心管中加入900 μl LB或SOC培养基，150 rpm，37°C振荡培养45 min，使菌体复苏，抗性基因表达。 
7. 5,000 rpm(2,500 × g)离心5 min，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀。室温正置10 min。 
8. 待菌液被平板吸收后，37°C倒置培养过夜。 
▲如果使用超级感受态细胞(转化效率>10⁸ cfu/μg)，可直接吸取100 - 200 μl孵育后的菌液涂板。剩余菌液可在4°C保存，一周之内都可重新涂板。 

实验案例2: DNA文库构建中接头连接反应 
1. 在微量离心管中配制如下连接反应体系: 

用移液器轻轻吹打混匀 
a. 产物为5'端磷酸化，3'端带dA的DNA片段。 
b. dA-Tailing产物与DNA Adapter的摩尔浓度比在1:10 - 1:20。 

2. 在PCR仪中进行连接反应: 

反应结束后，立即进行后续反应。